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抗體制備三個階段具體是什么

更新時間:2024-05-15      瀏覽次數(shù):420

   抗體是什么:

    抗體是哺乳動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心,它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)所分泌的一種免疫球蛋白,能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原,隨后通過介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來清除病原體。隨著抗體制備與改造技術(shù)的飛速發(fā)展,抗體已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個領(lǐng)域,包括科學(xué)研究、診斷、治療等。

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    抗體的制備歷史和工藝決定了抗體的質(zhì)量和類型??贵w制備工藝可分為三個階段:傳統(tǒng)方法免疫動物獲得抗體、應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備抗體和基因工程技術(shù)制備抗體。具體如下:

1、傳統(tǒng)方法免疫動物制備抗體:

    將通過各種方法獲得的免疫原(抗原)注射至動物(比如大鼠、小鼠和兔等)體內(nèi),刺激動物體內(nèi)B細(xì)胞分化成熟,產(chǎn)生、分泌抗體,再通過收集動物血清,分離純化而獲得成品抗體。由于早期免疫原制備、純化技術(shù)和成本限制,早期通過傳統(tǒng)方法制備的抗體多為多克隆抗體。此種方法成本相對較低,但需要使用大量動物,容易導(dǎo)致“虐dai動物",甚至?xí)驗(yàn)榕癲ai動物而遭天價罰款,并禁止多克隆抗體銷售。

2、應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備抗體:

    1975年英國科學(xué)家Milstein和法國科學(xué)家Kohler將鼠源的B淋巴細(xì)胞同腫瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞即具有B細(xì)胞的抗體、分泌功能,又具有腫瘤細(xì)胞的無限增殖功能。工藝上,首先采用皮下注射、腹腔注射和血管內(nèi)注射等方式向動物體內(nèi)注射免疫原,刺激動物產(chǎn)生特定的B細(xì)胞;然后處死動物,收集脾臟B細(xì)胞;體外融合B細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞制備雜交瘤細(xì)胞,體外篩選、培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞;通過體外擴(kuò)增雜交瘤細(xì)胞收集、純化培養(yǎng)基上清獲得抗體,或者在動物體內(nèi)(血管內(nèi)、腹腔等)注射雜交瘤細(xì)胞、收集和純化動物體液(腹水、血清等)獲得抗體。雜交瘤技術(shù)誕生了第一代單克隆抗體,這種抗體特異性高,易于大量。

3、基因工程技術(shù)制備抗體:

    基因功能技術(shù)使得研究者能在體外重組——將任一基因片段插入到特定表達(dá)載體(質(zhì)粒),通過將編輯好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入特定的細(xì)胞系和細(xì)胞系的體外擴(kuò)增、培養(yǎng),獲得基因片段在體外的轉(zhuǎn)錄、翻譯,從而制備抗體?;蚬こ碳夹g(shù)使得抗體的更加快速,并使得人源化抗體更為便捷,進(jìn)而成為臨床應(yīng)用的抗體藥物,用于臨床治療。這一技術(shù)產(chǎn)生的抗體是特異性ji高的均一抗體,易于工業(yè)化大量。近幾年,Abcam公司推出的重組單抗即為此類技術(shù)產(chǎn)生的抗體,特異性高,親和力強(qiáng)。



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